Для педиатров эта задача усложняется тем, что они постоянно имеют дело с растущим организмом ребенка. В связи с этим представления о норме и патологии в педиатрии достаточно сложны. Не случайно в настоящее время ставится вопрос о профилизации преподавания ряда теоретических и клинических дисциплин в медицинских институтах, таких, как нормальные анатомия и физиология, патологические анатомия и физиология, биохимия, фармакология, акушерство и гинекология, психиатрия, оториноларингология и др.
Внешние признаки сырья. Небольшое количество сырья раскладывают на специальную доску, матовое стекло, кусок линолеума, клеенку или глянцевую бумагу (размером 40 х 50 см) и внимательно рассматривают в различных положениях невооруженным глазом и под лупой с десятикратным увеличением.
Под названием «ц в е т к и» (соцветия), или «цветок» (Поз), в фармацевтической практике понимают высушенные соцветия (корзинки сложноцветных), цветки или их части. На сухом материале определяют тип соцветия, размеры цветка или соцветия, наличие волосков (опушенность), цвет, запах, вкус. Для изучения строения цветка или соцветия их предварительно размачивают, погружая в горячую воду на 5—10 мин.
Под названием «п л о д» в фармацевтической практике понимают лекарственное растительное сырье, представляющее собой истинные и ложные плоды, соплодия, сборные (сложные) плоды, а также их части: Плоды собирают обычно во время созревания или перед созреванием. При макроскопическом анализе плодов обращают внимание на форму, размеры, цвет, запах, вкус.
Макроскопический анализ подземных органов предусматривает изучение формы, определение размеров корней, корневищ, клубней, определение цвета с поверхности и на изломе, определение запаха (при разламывании) и вкуса. Для неочищенных объектов важное диагностическое значение имеет характер поверхности, которая может быть ровной или морщинистой (с продольным или поперечным рисунком складок), с рубцами от прикорневых листьев или буграми и точками — следы отмерших стеблей и корней.
Микроскопическому анализу лекарственного растительного сырья часто сопутствуют гистохимические реакции на различные вещества, содержащиеся в тканях растения, что в значительной степени помогает установлению подлинности лекарственного растительного сырья. Часто гистохимические реакции проводят для определения локализации биологически активных веществ в тканях растений.
Нагревание применяют только в тех случаях, когда в объекте нет веществ, которые могут изменяться от высокой температуры (например, крахмал), в противном случае препарат исследуют сначала без нагревания. Если к готовому микропрепарату требуется прибавить реактив или заменить включающую жидкость, то нужно нанести 1—2 капли реактива рядом с покровным стеклом, не снимая его, а с противоположной стороны отсосать жидкость полоской фильтровальной бумаги.
Размягчение материала можно проводить во влажной камере. Влажной камерой служит эксикатор, в который наливают воду; иногда используют стеклянный колпак на пришлифованной или смазанной жиром стеклянной пластинке, куда помещают широкую чашку с водой, а другую с сырьем. Сырье не должно соприкасаться с водой, оно должно увлажняться за счет паров в атмосфере камеры.
После соответствующей подготовки сырья из него готовят микропрепараты. Приготовление препарата зависит как от морфологической принадлежности сырья, так и от его состояния— цельное, резаное, порошкообразное. Основой микроскопического анализа является анатомия растений, так как без глубокого знания анатомического строения того или иного органа растения невозможно понять, какие элементы и какие особенности в строении органа можно рассматривать как диагностические признаки исследуемого объекта.
Исследования порошков листьев препараты готовят следующим образом: на предметное стекло наносят 2—3 капли раствора хлоралгидрата, куда помещают небольшое количество исследуемого порошка, взятого на кончике препаровальной иглы, предварительно смоченной этим раствором. Размешивают иглой порошок, накрывают покровным стеклом и прогревают 2—3 мин для просветления тканей листа.
Волоски. У большинства растений клетки эпидермиса образуют выросты - волоски (трихомы). Волоски являются одним из наиболее характерных диагностических элементов листьев, так как форма их чрезвычайно разнообразна. Встречаются волоски простые и головчатые. Простые волоски бывают одно- и многоклеточные, прямые, коленчатые и извилистые, разветвленные (звездчатые, многолучевые, многоконечные) и неразветвленные; так называемые пучковые волоски, состоящие из нескольких вытянутых клеток, как бы спаянных между собой.
Кристаллы. Чаще всего в растениях встречаются кристаллы щавелевокислого кальция, значительно реже — кристаллы других веществ (гипса, углекислого кальция, кремнезема и др.). Форма кристаллов оксалата кальция разнообразна и характерна для каждого вида растений, а в некоторых случаях для целого рода и даже семейства. Оксалат кальция встречается в виде одиночных и в виде сложных кристаллов: призматические кристаллы, рафиды, друзы, кристаллический песок (скопления многочисленных очень мелких кристаллов).
При микроскопическом исследовании цветков диагностическое значение имеют эпидермис внутренней и наружной сторон венчика и чашечки, клетки цветоложа и листочков обвертки (корзинки сложноцветных), разнообразные волоски, кристаллы оксалата кальция, эфирномасличные железки и т. д. Важным диагностическим признаком является пыльца.
Для микроскопического исследования коры обычно готовят поперечные срезы, реже продольные. Предварительно кусочки коры размягчают в воде, затем переносят в смесь вода — глицерин-—спирт (1:1:1). Размягченные куски коры выравнивают скальпелем, придавая поверхности среза строго поперечное (или продольное) направление и готовят срезы бритвой или бритвенным лезвием. Полученные срезы заключают в раствор хлоралгидрата, воду или глицерин, накрывают покровным стеклом и нагревают для просветления и удаления воздуха.
Для исследования под микроскопом обычно готовят поперечные срезы плодов и семян, которые размягчают чаще всего во влажной камере. Для изучения общей картины готовят более или менее толстые срезы через весь поперечник плода или семени. Для исследования деталей структуры срез должен быть тонким. Начиная делать срезы от верхушки плода или семени, первые срезы надо отбросить; для изучения следует взять срезы из средней части, в которых все элементы структуры представлены наиболее полно.
При изучении семян под микроскопом обычно обращают внимание на общее строение семени (характер кожуры, величину запасной питательной ткани — эндосперма, форму и расположение зародыша — корешка, семядолей, почечки зародыша). Более детально изучают кожуру семени, которая почти всегда состоит из нескольких слоев характерного строения. Наиболее важное диагностическое значение имеет механический слой кожуры, который состоит или из вытянутых элементов (типа волокон), или из округлых, изодиаметрических.
При изучении корней и корневищ обращают внимание на тип строения (первичное или вторичное строение), характер расположения проводящей ткани (пучковый или беспучковый тип строения). При пучковом типе строения обращают внимание на строение проводящих пучков (открытые или закрытые, коллатеральные или концентрические), характер их расположения ит. д.; при беспучковом типе — на характер древесины, расположение в ней сосудов, на ширину сердцевинных лучей.
При анализе порошков корней, корневищ, клубней наиболее важное диагностическое значение имеют обрывки сосудов и трахеид (в порошке всегда хорошо виден характер вторичного утолщения сосудов), механические элементы (волокна, каменистые клетки), кристаллы щавелевокислого кальция, крахмальные зерна (или другие запасные питательные вещества), в некоторых объектах — млечники, секреторные вместилища или их фрагменты, а также те или иные действующие вещества, которые открываются соответствующими реакциями.
Хлоралгидрат применяют в виде раствора; 20 частей хлоралгидрата растворяют при нагревании в 5 частях воды и прибавляют 5 частей глицерина, чтобы хлоралгидрат не выкристаллизовывался. Хлоралгидрат является одним из лучших просветляющих средств. Он отличается способностью быстро проникать в ткани.
Срезы для проведения гистохимических реакций не должны быть слишком тонкими; один-два слоя клеток должны быть не разрушенными, с сохранившимся содержимым. Следует также учитывать, что малое количество открываемых веществ требует минимального количества реактивов. Надо иметь в виду и то обстоятельство, что многие реактивы нестойки, поэтому требуют особых условий хранения или должны быть свежеприготовленными.
Реакция с флороглюцином и соляной кислотой. Срез помещают на предметное стекло в 1% раствор флороглю-цина в спирте, отсасывают реактив фильтровальной бумагой, на срез наносят каплю концентрированной соляной кислоты и через 1-—2 мин прибавляют каплю глицерина; накрывают покровным стеклом и изучают под микроскопом при малом увеличении.
Опробковевшие (суберинизированные) и кутинизированные оболочки клеток не дают реакций, характерных для чистой клетчатки. Суберин и кутин в составе клеточной оболочки можно обнаружить красителями, окрашивающими жиры. Существуют и специфические реакции на суберин и кутин.
Обнаружение крахмала под микроскопом. Крахмальные зерна хорошо видны в воде и в глицерине. Яркая картина наблюдается в поляризованном свете; в результате двойного лучепреломления крахмальные зерна дают черный крест, полосы которого пересекаются в центре наслоений зерна.
Растительные слизи являются полисахаридами разнообразного состава. Для их обнаружения в растительном материале чаще всего используют реакции, основанные на физических свойствах слизей. Реакция осаждения слизи в спирте и набухания в воде. Срез свежего растительного материала помещают в спирт, накрывают покровным стеклом и наблюдают в микроскоп. Слизь видна в клетках в виде комочков, сильно преломляющих свет.
Реакция с Суданом. Приготовление реактива и проведение реакции см. выше. Окрашивание жиров можно провести без нагревания. В этом случае срез помещают в реактив на сутки, затем промывают 50% спиртом и заключают в глицерин. Судан III окрашивает жиры в оранжево-красный цвет.
Содержимое млечников, представляющее собой эмульсию, включает разнообразные вещества: жиры, белки, камеди, каучук, гуттаперчу, воск, сахар, минеральные соли и другие вещества более специфического характера, такие, как алкалоиды, гликозиды, горечи. Млечный сок благодаря ряду веществ, входящих в его состав, окрашивается раствором Судана III в оранжево-крас-ный цвет и раствором алкаиина — в вишнево-красный.
Реакции осаждения алкалоидов проводят на предметном стекле, помещая в каплю реактива срез свежего растительного материала. Результат реакции наблюдают под микроскопом, сравнивая с контрольным препаратом. Другой вариант реакции: кусочки растительного материала помещают в один из указанных реактивов на 1—2 нед, после чего готовят срезы и заключают в глицерин.
Реакция со щелочью. Срез помещают на предметное стекло в небольшую каплю 5% раствора едкого натра или аммиака, прибавляют каплю глицерина, накрывают покровным стеклом и наблюдают под микроскопом красное или фиолетово-красное окрашивание тканей, в которых локализуются антраценпроизводные. Постепенно окраска распространяется по всему срезу (диффузия).
Реакция с раствором молибденово-кислого аммония (реакция Гардинера или Висселинга). Состав реактива: 25% раствор хлорида аммония — 1 часть, 50% раствор молибдата аммония — 1 часть; вода — 1 часть. Под действием этого реактива в клетках, содержащих дубильные вещества, выпадает желтый осадок; с танином реактив дает красный осадок.
Вещества характеризуются определенными энергетическими выходами люминесценции, которые выражаются отношением энергии люминесцентного излучения к поглощенной энергии. Для ярко люминесцирующих веществ энергетический выход люминесценции приближается к 100%. В большинстве случаев он значительно меньше, так как не вся поглощенная энергия возбуждающего света превращается в энергию люминесценции; часть ее переходит в тепловую или расходуется на другие безизлучательные процессы.
Для получения возбуждающего люминесценцию излучения используются главным образом газоразрядные лампы (ртутные, водородные, криптоновые, ксеноновые), реже — лампы накаливания. Наилучшим источником излучения считается такой, у которого наибольшее количество энергии приходится на долю излучения, необходимого для возбуждения люминесценции исследуемого вещества.
Для макролюминесцентного анализа лекарственного растительного сырья можно пользоваться различными источниками излучения, выделяя для возбуждения люминесценции ближний ультрафиолетовый свет, который обеспечивает довольно яркую...
Люминесцентный микроскоп МЛ-3 предназначен для наблюдения и фотографирования флюоресценции объектов, возбуждаемой ультрафиолетовыми и сине-фиолетовыми лучами. Источником излучения служит шаровая ртутная лампа сверхвысокого давления ДРШ-250. Для возбуждения люминесценции из общего излучения лампы с помощью светофильтров выделяется ближний ультрафиолетовый свет (максимум при X 365 нм) или сине-фиолетовый свет (максимум при X 400 нм).
Микроскоп МЛ-2 позволяет вести наблюдение объектов в свете люминесценции при освещении их сверху, через объектив, падающим светом. При этом одновременно с наблюдением флюоресценции объекта можно его освещать, снизу, используя конденсор темного поля ОИ-13 (смешанное освещение) или фазово-контрастное устройство КФ-4.
Люминесцентный осветитель О С Л - 1 позволяет освещать препараты в биологическом микроскопе как сверху, через опак-иллюминатор, так и снизу, через конденсор. Таким образом, с помощью люминесцентного осветителя ОСЛ-1 можно вести изучение флюоресценции препарата как в падающем свете, так и в проходящем. Источником света служит дуговая ртутная лампа ДРШ-250. Возбуждение люминесценции возможно в диапазоне 365—440 нм.
Выбор включающей жидкости зависит от химического состава объекта. Включающая жидкость не должна растворять флюоресцирующие вещества, иначе свечение жидкости будет мешать наблюдению люминесценции препарата. Раствор хлоралгидрата, который широко используется в обычной микроскопии, здесь не подходит, так как хлоралгидрат является тушителем флюоресценции.
а) Для изучения по внешним признакам: семена льна, клубни салепа, корни алтея, ламинария, листья подорожника большого, среднего, ланцетнолистного. б) Для микроскопического исследования: семена льна, размягченные во влажной камере и запаянные в парафиновый блок; порошок корня алтея, клубней салепа; корни алтея, размоченные в смеси спирта с глицерином; листья подорожника большого, просветленные в растворе щелочи и отмытые в воде.
Микроскопия (рис. 2). Порошок рассматривают в растворе хлоралгидрата (без нагревания). При этом заметно много крахмального клейстера в виде крупных глыбок различной формы, изредка встречаются крахмальные зерна (из внутренних частей клубня); зерна овальные или округлые, довольно крупные (20—25 мкм), со слабо заметным центром наслоения.
Порошок корня алтея желтовато-белого цвета. Под микроскопом (рис. 4) характерны слабоутолщенные волокна, лежащие группами и одиночно; обрывки сосудов сетчатых, лестничных и узких пористых трахеид; крахмальные зерна (см. в воде, глицерине овальные, редко округлые, простые и двух-пятисложные; размеры крахмальных зерен от 5—10 до 15— 28 мкм в диаметре; встречаются обрывки паренхимы с крахмалом и друзами.
Лист продолговатояйцевидный или широколанцетовидный с заостренной верхушкой, притуплённым основанием и коротким черешком. Край листа остропильчатый, зубцы неодинаковые — крупные чередуются с мелкими. На поверхности листа в стереомикроскоп или под лупой видны блестящие темно-желтые железки, а по жилкам — одиночные волоски.
Микроскопия (рис. 8). Препарат листа с поверхности. Клетки эпидермиса верхней стороны листа в очертании многоугольные или слегка извилистые, местами с четковидным утолщением оболочек; близ жилок и по краю листа заметна складчатость кутикулы. Клетки нижнего эпидермиса слабоизвилистые в очертании.
Листья эвкалипта прутовидного на старых ветвях черешковые, от узколанцетных до серповидноизогнутых, остроконечные, длина их 4—27 см, ширина 0,5—5 см; листья молодых ветвей без черешка или на коротком черешке, удлиненнояйцевидные, у основания с сердцевидной выемкой, наверху заостренные, длина 3,5—11 см, ширина 4—7 см. Все листья цельно-крайние, голые; старые — кожистые, плотные, жесткие; молодые — слабокожистые, мягкие.
Под эпидермисом — гиподерма — состоит из крупных прямоугольных клеток, содержащих капельки эфирного масла. Кора широкая, образованная однородными овальными клетками, заполненными крахмалом. Крахмальные зерна мелкие (3—9 мкм), овальные или округлые, простые и двух-, пятисложные. Эндодерма хорошо заметна.
Микроскопия (рис. 12). Плод аниса заключают в парафиновый блок и делают поперечный срез. На поперечном срезе плод имеет почти округлый контур с 10 выступами, соответствующими ребрам, в которых расположены проводящие пучки. Клетки экзокарпия (эпидермиса) местами образуют грубобородавчатые 1—2-кле-точные волоски, часто слегка изогнутые.
Микроскопия (рис. 14). Лист тимьяна с поверхности. Клетки верхнего эпидермиса имеют слабоизвилистые стенки с четковидными утолщениями, заметна складчатость кутикулы. Клетки нижнего эпидермиса с сильноизвилистыми стенками. Устьица окружены двумя клетками эпидермиса. Эфирномасличные железки многочисленные, особенно на нижней стороне листа; они состоят из 8 (нередко до 12) выделительных клеток.
Прицветники длиннее чашечки, продолговатые, острые, темно-пурпурные или зеленовато-пурпурные. Чашечка с треугольно-ланцетовидными зубцами, голая или с редкими волосками, ее окраска, как у прицветников. Венчик двугубый темно-пурпурный или фиолетово-розовый. Запах сырья ароматный, вкус горьковато-пряный, слегка вяжущий. Вид очень полиморфный. В зависимости от мест произрастания форма соцветий, форма и размеры листьев варьируют.
Сырье состоит из цельных корзинок с короткими цветоносами не длиннее 3 см. Корзинки полушаровидные или конические, 4—8 мм в диаметре (без язычковых цветков). Обвертка корзинки 2—3-рядная, состоит из черепитчато расположенных мелких продолговато-яйцевидных, зеленоватых листочков с плотной срединной жилкой и пленчатым краем. Краевые цветки язычковые, пестичные — широкие, лопатчатые, с тремя зубчиками.
Материал: а) Для изучения по внешним признакам: трава полыни горькой, тысячелистника, золототысячника, листья трилистника водяного, корлевище аира, корень одуванчика, б) Для микроскопического исследования: листья полыни горькой, тысячелистника, трилистника водяного, прокипяченные в щелочи и промытые в воде; корневища аира, корни одуванчика, размоченные в смеси спирта и глицерина.
Микроскопия (рис. 21). Препарат листа с поверхности. Клетки эпидермиса с обеих сторон несколько вытянуты по длине дольки листа, в очертании извилистые; нижний эпидермис отличается более мелкими клетками с сильно извилистым контуром. Устьица с обеих сторон, на нижней — их значительно больше. Они ориентированы по длине дольки, окружены чаще всего 4—5 клетками.
Излом неровный, слабозернистый, пористый; на изломе свежее сырье беловато-розового цвета, лежалое — желтовато-белого. Запах своеобразный; вкус горький, слегка жгучий. Корневище аира очищенное — куски с гладкой поверхностью. Цвет сырья желтовато-серый. Длина кусков 5—10—15 см, в поперечнике 0,5—1,5 см. Микроскопия (рис. 23). Поперечный срез корневища.
Микроскопы позволяют получать увеличенное изображение мелких объектов и совершенно необходимы для изучения анатомического строения растений. Микроскопы бывают двух видов: визуальные (изображение рассматривается непосредственно в микроскоп) и проекционные (изображение проектируется на экран). Первые находят более широкое применение.
Основным достоинством стерео микроскопа является то, что он позволяет видеть предметы объемными и дает прямое изображение. Это значительно облегчает исследование. Отечественная промышленное выпускает несколько моделей стерео микроскопов. К микроскопу прилагаются четыре пары окуляров с увеличением 6х, 8х, 12,5 х, 17 х и измерительный окуляр 8 х со шкалой и сеткой. Микроскоп позволяет получать увеличение объекта от 3,5 х до 119 х.
При исследовании лекарственного растительного сырья применяют биологические микроскопы, которые фактически являются универсальными. Имеется несколько моделей биологических микроскопов. Из них наиболее распространен биологический рабочий микроскоп МБР-1.
Лабораторный поляризационный микроскоп МИН-8. Это более совершенный прибор, предназначенный для исследования прозрачных препаратов в проходящем свете при ортоскопическом и коноскопическом ходе лучей. Микроскоп МИН-8 имеет жесткий штатив со встроенным осветителем, вращающийся предметный столик с нониусами для отсчета угла поворота, механизм для фокусировки р центрировки линзы Бертрана.
Наиболее простым является осветитель О И - 3 1; его устанавливают вместо зеркала под конденсором микроскопа. Источником света служит лампа накаливания, питающаяся непосредственно от электросети, без трансформатора. Осветитель ОИ-19 состоит из двух линзового коллектора и ирисовой диафрагмы, смонтированных в корпусе, укрепленном на штативе. Источником света служит лампа накаливания СЦ61, питаемая через понижающий трансформатор.
Микроскопия (рис. 83). Препарат листа с поверхности. Клетки эпидермиса с обеих сторон листа извилистые в очертании, устьица с обеих сторон листа. Они крупные, овальной формы, с резко очерченной устьичной щелью, окружены, как правило, 3 клетками эпидермиса, из которых одна заметно мельче других. Кутикула с обеих сторон складчатая; особенно хорошо заметна складчатость кутикулы вокруг устьиц, где она большей частью лучистая.
Микроскопия (рис. 80). Поперечный срез корня. Снаружи корень покрыт слоем пробки, состоящей из очень мелких клеток. Кора довольно рыхлая. Кольцо камбия хорошо заметно. Проводящие элементы луба и древесины расположены отдельными радиальными участками, между которыми лежит паренхима. Особенно характерно расположение сосудов; они образуют участки в виде треугольника, обращенного основанием к камбию, а вытянутой вершиной — к центру.
Микроскопия (рис. 79). Поперечный срез корневища. Корневище покрыто довольно тонким слоем пробки. Под пробкой основная паренхима, в которой проводящие пучки образуют прерывистое кольцо (пучковый тип строения). Проводящие пучки корневища на поперечном разрезе овальной формы. Часто встречаются пучки косо разрезанные.
Микроскопия (рис. 78). На поперечном срезе коры видна бурая многорядная пробка, несколько рядов колленхимы, а далее расположен механический пояс, который состоит из групп волокон, чередующихся с группами каменистых клеток. В коре молодых ветвей (толщиной до 2 мм) механический пояс местами прерывается паренхимой. В коре толщиной 3—4 мм механический пояс обычно сплошной. В старой коре (со следами корки) механического пояса нет: при образовании вторичных слоев пробки и развитии корки он попадает в зону отмерших тканей.
Микроскопия (рис. 77). Препарат листочка с поверхности. Клетки верхнего эпидермиса в очертании многоугольные или слегка волнистые; нижнего — с сильно извилистым контуром. Над жилками клетки эпидермиса сильно вытянуты с прямыми боковыми стенками. Устьица с обеих сторон, с нижней — их значительно больше. Они овальные, слегка погруженные, окружены чаще всего 3—4 клетками эпидермиса.
Микроскопия (рис. 76). Поперечный срез корня. На поперечном срезе снаружи видна многослойная пробка; кора корня пронизана многочисленными секреторными каналами, образованными одним слоем выделительных клеток и заполненных зеленовато-желтым содержимым. На поперечном срезе корня секреторные каналы лежат концентрическими рядами; в прикамбиальной зоне они мелкие, ближе к пробке — значительно крупнее.
Микроскопия (рис. 75). Поперечный срез мерикарпия. Слой экзо-карпия (эпидермис) состоит из овальных клеток, которые изредка образуют одноклеточные сосочковидные волоски. Наружная часть мезокарпия представлена одним или несколькими слоями паренхимных клеток.
Микроскопия (рис. 74). Поперечный срез корня. Покровная ткань корня — многорядная, слущивающаяся пробка желтовато-серого цвета. Кора довольно узкая. Проводящие элементы луба образуют небольшие участки, разделенные широкими сердцевинными лучами, состоящими из тангентально вытянутых клеток. Более старые элементы луба часто облитерированы.
Микроскопия (рис. 73). Препарат листа с поверхности. Клетки эпидермиса с верхней стороны многоугольные с прямыми стенками, местами с четковидными утолщениями. Клетки эпидермиса на нижней стороне с извилистыми боковыми стенками. Устьица с обеих сторон листа, окружены 2—4 клетками эпидермиса. По всей поверхности листа многочисленные простые 2—3-клеточные толстостенные волоски, направленные к верхней части листа.
Внешние признаки. Стебли длиной 10—30 см, зеленые или пурпурно-фиолетовые, ветвистые. Ветви длинные, цилиндрические с мелкобороздчатой поверхностью, в узлах слегка вздутые, очень прочные. Междоузлия 1—1,5 см, самые нижние до 2— 3 см. Листья длиной 1,5—2 см, шириной 0,5—1 см, от широкоэллиптических до продолговатых, почти линейных, но на одном растении все одинаковой формы.
Микроскопия (рис. 69). Для приготовления препарата сырье кипятят в воде. Затем рассматривают в растворе хлоралгидрата. На цветках, особенно на концах зубцов, видны многочисленные овальные железки на короткой одноклеточной ножке; железки 1 —2-рядные, многоярусные, "часто с пузырчато-вздутой кутикулой. Край зубчиков у цветков бахромчатый, состоит из сосочковидных выростов.
Микроскопия (рис. 68). Препарат листа с поверхности. Клетки эпидермиса с извилистыми боковыми стенками, особенно на нижней стороне. Устьица только на нижней стороне, окружены 3—4 клетками, редко двумя. Эфирномасличные железки расположены с обеих сторон листа в углублениях эпидермиса; обычно бесцветные, округлые, различные по размерам, состоят из 2—4—6, редко 8 выделительных клеток, слабо дифференцированных.
Микроскопия (рис. 66). Цветки боярышника кроваво-красного, кипятят в воде и части цветка заключают в раствор хлоралгидрата. Клетки эпидермиса чашелистиков и лепестков венчика с прямыми или слабоизвилистыми стенками, у основания и по краю со складчатой кутикулой. Устьица редкие, окружены 5—8 клетками. Клетки внутреннего эпидермиса лепестков имеют сосочковидные выросты.
Внешние признаки. Стебли облиственныё, длиной до 30 см, с цветками, частично с бутонами и незрелыми плодами. Стебли ветвистые только в верхней части; цилиндрические, голые, с двумя продольными ребрами, ветви супротивные. Листья супротивные, сидячие, длиной до 3,5 см и шириной 1,4 см, удлиненно-овальные, тупые, цельнокрайние, с многочисленными просвечивающими вместилищами в виде светлых и темных точек.
Качественные реакции. Соскоб с раствором щелочи дает красное окрашивание (антраценпроизводные), с раствором железоаммониевых квасцов — черно-зеленое (дубильные вещества). Внешние признаки. Сырьем являются корневища и корни, освобожденные от остатков стебля и очень тонких корней. Куски корневищ и корней 4—15 мм в диаметре, длиной 5—15 см, снаружи покрыты темно-коричневой легко отслаивающейся пробкой.
Микроскопия (рис. 60). Поперечный разрез корня. Пробка состоит из нескольких слоев клеток. Далее лежит красно-коричневый слой феллодермы — крупные клетки с утолщенными тангентальными стенками. В паренхиме коры и древесины содержатся характерные для ревеня очень крупные (до 100—120 мкм) друзы оксалата кальция.
Кора имеет вид желобоватых или свернутых в трубочку кусков толщиной от 0,5— 1 до 2 мм, различной длины (от 10 до 20—25 см). Наружная поверхность коры коричневато-серого или темно-серого цвета, почти гладкая или с едва заметной продольной морщинистостью и поперечновытянутыми беловатыми чечевичками; у более старой коры чечевички имеют вид светло-серых, слегка выступающих над поверхностью коры пятен.
Основная ткань корневища представляет собой довольно рыхлую паренхиму, состоящую из округлых клеток с толстыми оболочками и обильным зернистым содержимым. Наиболее крупные проводящие пучки образуют в периферической части корневища кольцо. Они коллатеральные, открытые, в поперечном сечении веретено видные, флоэмой обращены кнаружи.
Основная ткань корневища представляет собой довольно рыхлую паренхиму, состоящую из округлых клеток с толстыми оболочками и обильным зернистым содержимым. Наиболее крупные проводящие пучки образуют в периферической части корневища кольцо. Они коллатеральные, открытые, в поперечном сечении веретено видные, флоэмой обращены кнаружи.
Производящие растения — фиалка трехцветная (Иван да Марья, Анютины глазки) — фиалка полевая— фиалковые Внешние признаки. Сырье состоит из стеблей с листьями, цветками, частично с плодами. Листья очередные с крупными лировидными или перисто раздельными прилистниками, опушенными короткими волосками. У фиалки трехцветной нижние листья черешковые яйцевидно треугольные с клиновидным основанием.
Порошок семян горчицы светло-желтого цвета. Под микроскопом характерны следующие элементы: обрывки склеренхимного слоя с характерной «теневой сеткой», обусловленной неодинаковой высотой клеток, встречаются обрывки этого слоя в поперечном сечении. Фрагменты алейронового слоя распознаются по зернистому содержимому — алейроновые зерна. Встречаются обрывки пигментного слоя, эпидермиса, «гигантских клеток», тканей зародыша и фрагменты, состоящие из нескольких слоев клеток кожуры.
Материал: а) Для изучения по внешним признакам: семена горчицы, б) Для микроскопического исследования; семена горчицы, размягченные во влажной камере и заключенные в парафиновый блок; порошок семян горчицы. Реактивы: растворы хлоралгидрата, судана III, черная тушь, концентрированный раствор едкого кали. Семена сарептской горчицы от 1,2 до 1,8 мм в диаметре, красновато-коричневого цвета от темных до светлых оттенков с сизоватым налетом.
Клетки верхнего эпидермиса довольно крупные, в очертании слегка извилистые. Нижний эпидермис состоит из более мелких клеток с сильно извилистым контуром. Устьица — с обеих сторон. На верхней стороне они редкие, на нижней — многочисленные, расположены, как правило, между двумя клетками эпидермиса, смежные стенки которых перпендикулярны устричной щели. Изредка встречаются устьица, окруженные 3—4 клетками.
В сырье куски корневищ с корнями. Корневища деревянистые, неправильной формы, изогнутые, разветвленные, реже цилиндрические, со слабыми кольцевыми утолщениями, от которых отходят придаточные корни. Поверхность слегка морщинистая, желтовато-серого цвета. Корни малочисленные, цилиндрические, сильно изогнутые и глубоко продольноморщинистые.
Микроскопия (рис. 51). Поперечный срез корня. Покровная ткань корня представлена несколькими слоями пробки, состоящей из светло-бурых тонкостенных клеток. Далее следует паренхима коры — крупные, тангентально вытянутые клетки, со слегка утолщенными оболочками.
Порошок корня солодки светло-желтого цвета. Основное диагностическое значение в порошке имеют следующие элементы (рис. 48): группы волокон с кристаллоносной обкладкой из призматических кристаллов; обрывки сосудов с широкими короткими члениками («бочковидные») имеют окаймленные поры; сетчатые — более узкие; обрывки трахеид с окаймленными порами; клетки паренхимы с крахмалом и отдельные крахмальные зерна; фрагменты тканей коры и облитерированного луба.
Материал: а) Для изучения по внешним признакам: корни солодки, корневище с корнями синюхи, корни женьшеня, аралии манчжурской, корневище с корнями элеутерококка, эхи-нопанакса, трава хвоща полевого, почечного чая, корневище с корнями диоскореи. б) Для микроскопического исследования: корни солодки, синюхи, женьшеня, размоченные в смеси спирта с глицерином; листья почечного чая, просветленные кипячением в щелочи и отмытые в воде, порошок корня солодки.
Микроскопия (рис. 45). Препарат листа с поверхности. Клетки эпидермиса очень мелкие со слегка извилистым контуром. С верхней стороны стенки клеток местами имеют четковидные утолщения. Устьица мелкие, овальные, с обеих сторон листа (на нижней стороне их больше), окружены тремя клетками эпидермиса, из которых одна значительно мельче двух других, что характерно для растений семейства крестоцветных.
Микроскопия (рис. 43). Препарат листа с поверхности. Клетки эпидермиса с обеих сторон листа вытянуты по длине листа. Устьица с обеих сторон листа; они округлые, ориентированы по длине листа и окружены, как правило, 4 клетками. Характерно расположение палисадной и губчатой ткани.
Микроскопия (рис. 41). Препарат листа с поверхности. Клетки эпидермиса с обеих сторон листа крупные, сильно извилистые в очертании, особенно с нижней стороны, и несколько вытянуты по длине дольки. Клетки верхнего эпидермиса иногда имеют четковидные утолщения. У основания листа с обеих сторон эпидермис состоит из клеток с малоизвилистым контуром с четковидноутолщенными оболочками.
Поперечный срез корня. Во всей толще коры в большом количестве проходят млечники нечленистого типа. На поперечном срезе корня они встречаются в поперечном сечении, но в самых старых участках коры, под пробкой, млечники встречаются разрезанными вдоль, так как здесь они имеют ответвления, направленные перпендикулярно продольной оси корня.
Внутренняя поверхность гладкая или с мелкими продольными ребрышками желтовато-серого цвета. Излом ровный, зернистый, в наружной части слегка волокнистый; волокна шелковистые, мягкие. Микроскопия (рис. 37). Поперечный срез коры. Пробка из многих (10—15) слоев клеток. Под пробкой лежит колленхима, состоящая из тангентально вытянутых клеток.
Порошок листьев зеленого цвета. В препарате под микроскопом (рис. 34) наиболее характерны обрывки эпидермиса, который часто имеет сочковидные выросты, и волоски, встречающиеся на фрагментах листа и отдельно.
Порошок листьев зеленого или светло-зеленого цвета. В препарате порошка (рис. 30) диагностическое значение имеют обрывки эпидермиса, фрагменты листа, редкие волоски. Во фрагментах листа в поперечном сечении видна однорядная палисадная ткань, очень рыхлая губчатая ткань; клетки верхнего эпидермиса часто с небольшими выступами в виде сосочков, обрывки волосков встречаются редко.
Наперстянка крупноцветковая. Препарат листа с поверхности (рис. 29). Клетки эпидермиса листа несколько крупнее, чем у наперстянки пурпуровой. С верхней стороны они многоугольные или слегка волнистые в очертании, по краю и в верхней части листа имеют небольшие сосочковые выросты; местами оболочки клеток четковидно утолщены.
Наперстянка ржавая. Листья крупные, длиной от 7 до 40 см, ланцетовидной и продолговато ланцетовидной формы, тупозаостренные на верхушке и постепенно суживающиеся к основанию, где пластинка листа постепенно переходит в крылатый черешок; верхние стеблевые листья без черешка. Край листа цельный или с редкими едва заметными зубчиками в виде небольших выступов.
Материал: а) Для изучения по внешним признакам: листья наперстянки пурпуровой, крупноцветковой,, шерстистой, ржавой, реснитчатой, листья олеандра, кора обвойника, корневища и корни кендыря, трава горицвета, трава ландыша, трава желтушника, корневище с корнями морозника, б) Для микроскопического исследования: листья указанных выше видов наперстянки, горицвета, ландыша, желтушника, просветленные кипячением в щелочи и отмытые в воде.
Внешние признаки. Корни цельные или в виде крупных кусков, цилиндрические, простые, редко разветвленные, морщинистые, иногда продольно перекрученные, плотные, хрупкие. Излом ровный; на изломе заметна широкая серовато-белая кора и желтая древесина в центре корня. Под лупой в коре наблюдаются многочисленные, темные, концентрические пояса (млечники).
Заливка материала в целлоидин производится примерно по этой же схеме. Растворителем целлоидина служит смесь спирта с эфиром (1 :1). Заливку в желатину производят следующим путем: хорошо отмытый водой от фиксатора материал помещают на несколько часов (до суток) в жидкий раствор желатины, затем на такое же время в густой раствор (в термостате при 37° С), а затем заливают густым (1:3) раствором желатины и быстро охлаждают. Вырезанный блок помещают для уплотнения в 5—10% раствор формалина, а перед изготовлением срезов промывают в воде 30—60 мин.
Для изготовления парафиновых блоков берут парафин особых сортов, которые отличаются чистотой, однородностью и аморфностью. Исследуемый материал, предварительно обезвоженный и находящийся в абсолютном спирте необходимо перед заливкой пропитать парафином. Это очень длительная и трудоемкая операция, от тщательности проведения которой зависит успех резки материала.
Микротом. Для получения одинаковых очень тонких срезов в виде непрерывного ряда используют микротомы. В настоящее время существует много различных типов микротома, из которых наиболее распространенным и универсальным является тип санных (или салазочных) микротомов. Различные конструкции санных микротомов отличаются между собой главным образом принципом устройства для подачи объекта к ножу.
Промышленностью выпускается несколько моделей микрофотонасадки (МФН-1, МФН-2, МФН-3 и др.), конструкция которых отличается только в отдельных деталях. Для получения удовлетворительных микрофотографий необходимо применение источников света, имеющих большую яркость. Особые требования предъявляются к оптической системе микроскопа. Апохроматические и ахроматические объективы имеют значительную кривизну изображения, поэтому для микрофотографирования они должны применяться с гомалами вместо окуляров.
Как дополнительные принадлежности к микроскопам выпускают окулярные насадки. В учебном процессе наиболее часто используют демонстрационную насадку АУ-14, которая дает возможность производить наблюдение объектов одновременно двум наблюдателям. Насадку устанавливают на тубусе микроскопа. В фокальной плоскости окуляра расположен наконечник подвижного указателя, который можно установить на интересующей детали препарата.
